A Highway 401, também conhecida como Via Expressa Macdonald-Cartier, é uma rodovia localizada em Ontário, Canadá, e ao mesmo tempo uma via expressa em sua extensão. É uma rodovia provincial, diretamente administrada pela província de Ontário. Corre entre Windsor e a fronteira do Quebec, onde continua com o nome de Quebec Autoroute 20. A Highway 401, ao longo de seu trecho em Toronto, é considerada a via expressa mais movimentada do mundo, possuindo entre cinco e oito faixas por sentido na maior parte da Região Metropolitana de Toronto.
The key high-volume highways in Ontario are the 400-series highways in the southern part of the province. The most important of these is the 401, the busiest highway in North America, with average annual daily traffic (AADT) of more than 425,000 vehicles in 2004 and daily traffic sometimes exceeding 500,000 vehicles.